中藥提取物微生物限度檢查操作規(guī)范

　　中藥提取物微生物限度檢查操作規(guī)范如下：

　　一、實驗前準備

　　了解藥品性質：明確中藥提取物的成分、劑型、用途等信息，以便選擇合適的檢查方法和實驗條件。

　　準備實驗器材和試劑：

　　儀器設備：包括微生物限度檢測儀、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、顯微鏡、天平、無菌棉簽、無菌水等。

　　培養(yǎng)基：根據檢查項目選擇合適的培養(yǎng)基，如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(用于需氧菌總數檢查)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(用于霉菌和酵母菌總數檢查)、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(用于大腸埃希菌檢查)等。

　　稀釋劑：如0.9%無菌氯化鈉溶液，用于制備供試液。

　　確認實驗環(huán)境：

　　微生物限度檢查應在潔凈度不低于萬級的環(huán)境下進行，局部操作區(qū)域潔凈度需達到百級。

　　實驗室應定期進行潔凈度監(jiān)測，確保符合規(guī)定要求。

　　人員培訓：實驗人員需經過專業(yè)培訓，熟悉實驗操作流程和注意事項，具備正確的操作技能。

　　二、采樣與供試液制備

　　采樣：

　　根據中藥提取物的生產和使用環(huán)節(jié)，制定合理的采樣方案。

　　使用無菌的采樣工具和容器，確保樣品在采集過程中不受污染。

　　記錄采樣的時間、地點、樣品信息等。

　　供試液制備：

　　稱取一定量的中藥提取物(一般取10g作為檢測樣本)，加入適量的稀釋劑(如0.9%無菌氯化鈉溶液)，按照1:10的比例稀釋。

　　充分振蕩混合，使微生物從提取物上洗脫下來，制備成供試液。

　　供試液從制備到加入檢驗用培養(yǎng)基不得超過1小時，制備時若需加溫應加熱均勻且溫度不得超過45℃。

　　三、實驗操作流程

　　培養(yǎng)基準備：

　　根據實驗要求，配制適量的培養(yǎng)基，并確保其質量和適用性。

　　對培養(yǎng)基進行質量把控，如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的pH值應控制在7.2-7.4之間。

　　接種與培養(yǎng)：

　　需氧菌總數檢查：取供試液1ml，傾注平板法接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，凝固后倒置培養(yǎng)于35℃±2℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48小時±2小時。

　　霉菌和酵母菌總數檢查：取供試液1ml，傾注平板法接種于玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，凝固后倒置培養(yǎng)于23-28℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5天。

　　控制菌檢查：如大腸埃希菌檢查，取供試液接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)于35-37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18-24小時。

　　觀察與計數：

　　在規(guī)定的培養(yǎng)時間內，觀察實驗結果，包括菌落形態(tài)、數量、顏色等指標。

　　使用菌落計數器或顯微鏡進行細菌和霉菌的鑒別與計數。

　　每一個平板上的菌落數應在30-300之間為有效計數范圍，超出此范圍的結果可能不準確，需重新檢測。

　　四、結果判定與報告

　　結果判定標準：

　　根據《中國藥典》等標準規(guī)定，制定相應的微生物限度判定標準。

　　例如，需氧菌總數應不超過一定限度(如1000CFU/g)，霉菌和酵母菌總數應不超過一定限度(如100CFU/g)，控制菌如大腸埃希菌、沙門菌等不得檢出。

　　結果報告：

　　將實驗結果進行整理和分析，撰寫報告并提交給相關部門或人員。

　　報告內容應包括實驗名稱、樣品信息、實驗操作步驟、觀察結果、判定結果等關鍵信息。

　　五、實驗后處理

　　實驗廢棄物處理：

　　對用過的培養(yǎng)基、帶菌的樣本等實驗廢棄物進行妥善處理。

　　例如，經高壓蒸汽滅菌處理(一般為121℃、15-20分鐘)，防止微生物擴散造成污染。

　　實驗器材清洗與滅菌：

　　對使用過的玻璃器皿如培養(yǎng)皿、吸管等進行嚴格的清洗和滅菌處理。

　　一般采用干熱滅菌法(在160-170℃下滅菌2小時)或高壓蒸汽滅菌法(121℃滅菌30分鐘)。